奶牛子宮內(nèi)膜上皮外培養(yǎng)及鑒定

試驗采用酶消化及機(jī)械法相結(jié)合的方法培養(yǎng)奶牛子宮內(nèi)膜上皮原代細(xì)胞及傳代細(xì)胞。酶消化法采用0.1%鏈蛋白酶于4℃消化16~20h,機(jī)械法采用手術(shù)刀刮取子宮角內(nèi)膜。獲得原代分離的細(xì)胞后,采用胰蛋白酶消化法進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)。試驗應(yīng)用角蛋白抗體對細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定,并對第3代奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞用MTT法繪制增殖曲線。結(jié)果顯示,細(xì)胞在相差顯微鏡下呈明顯的上皮樣細(xì)胞形態(tài),細(xì)胞傳代到第8代時,仍能保持與原代細(xì)胞相似的細(xì)胞形態(tài)特征及生長狀態(tài)。同時細(xì)胞角蛋白染色陽性細(xì)胞占80%以上。試驗結(jié)果表明,應(yīng)用酶消化和機(jī)械法可成功分離并培養(yǎng)數(shù)量、活力和純度均較高的子宮內(nèi)膜細(xì)胞,可操作性強(qiáng),可在具備基本細(xì)胞培養(yǎng)條件的實驗室應(yīng)用推廣。